elisa的檢測方法是什么？ 介紹ELISA檢測方法

1.ELISA是酶聯(lián)免疫吸附法 (Enzyme-linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 簡稱。是指在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型免疫測定技術(shù)。

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2、原理如下： （1）將抗原或抗體結(jié)合到某些固相載體表面，并保持其免疫活性。

（2）將抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，既保留了其免疫活性，又保留了酶的活性。測定時，將待檢標本(測定的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同工藝與固相載體表面的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)。固相載體上形成的抗原抗體復合物通過清洗與其他物質(zhì)分離，最終將固相載體上的酶量與標本中待檢物質(zhì)的量成一定比例。添加酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的數(shù)量與標本中待檢物質(zhì)的數(shù)量密切相關(guān)，因此可以根據(jù)顏色反應(yīng)的深度進行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，反應(yīng)效果可以大大放大，從而使測定方法達到很高的敏感性。

elisa 檢測方法是什么？

ELISA是酶聯(lián)免疫吸附法 (Enzyme-linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 簡稱。指在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型免疫測定技術(shù) 。

原理如下：①將抗原或抗體結(jié)合到一定的固相載體表面，并保持其免疫活性。

②將抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，既保留了它們的免疫活性，又保留了酶的活性。測定時，將待檢標本(測定的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同工藝與固相載體表面的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)。固相載體上形成的抗原抗體復合物通過清洗與其他物質(zhì)分離，最終將固相載體上的酶量與標本中待檢物質(zhì)的量成一定比例。添加酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的數(shù)量與標本中待檢物質(zhì)的數(shù)量密切相關(guān)，因此可以根據(jù)顏色反應(yīng)的深度進行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，反應(yīng)效果可以大大放大，從而使測定方法達到很高的敏感性。

ELISA有哪些方法？

所有ELISA測試方法的缺點都很明顯：1、重復性差；2、受自身抗體、嗜異性抗體等影響，易發(fā)生假陽性；3、無論是儀器還是手工操作，都有很多干擾因素。溫度和時間影響較大。

1.直接法（direct ELISA）將抗原直接固定在固相載體上，參與酶標記的一級抗體可以測量抗原的總量。這種一級抗體的非特異性非常重要。

優(yōu)點：操作程序簡單，因為不需要使用二抗來防止交互反應(yīng)。缺陷：試驗中的抗體應(yīng)用酶標記，但并非每種抗體都能標記，成本相對較高。2.間接法（indirect ELISA）這種測定方法類似于直接方法。不同的是，一級抗體沒有酶標記，用酶符號的二級抗體來識別一級抗體來測量抗原量。優(yōu)點:二抗可以增強信號，有很多選擇可以做不同的測量分析。

沒有酶標記的一級抗體可以儲存其最大的免疫反應(yīng)。缺陷:交互反應(yīng)發(fā)作的概率很高。3.雙抗體三明治法（sandwich ELISA）被檢測的抗原包在兩個抗體之間，其中一個將抗原固定在固相載體上，即捕獲抗體。

另一種是檢測抗體，用酶標記后可以直接測量抗原的量；或者沒有標記，然后用酶符號的二次抗體測量抗原的量。這兩種抗體必須仔細選擇，以避免相互反應(yīng)或競爭相同的抗原連接位置。優(yōu)點：活性高，專業(yè)化程度高，抗原不需要提前凈化。

缺陷：抗原必須有多個抗體連接位置。4.競爭法（competitive ELISA）樣品中的抗原（自由抗原）與純化固定在固相載體上的抗原（固定抗原）競爭相同的抗體。樣品中的自由抗原越多，抗體就越多，固定抗原只能接觸較少的抗體，反之亦然。在清洗過程中，自由抗原和抗體的復合物被沖走，只留下固定抗原和抗體的復合物。與固定抗原的對照組成效果相比，樣品中的抗原含量可根據(jù)顏色差計算。

優(yōu)點：可適用于不良樣本，數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高。缺陷：整體敏感性和專一性較差。

elisa實驗的原理是什么？

ELISA的實驗原理是酶分子與抗體或抗體分子的結(jié)合，它不會改變抗體的免疫特性，也不會影響酶的生物活性。酶標記抗體可與固相載體上吸附的抗原或抗體結(jié)合。

滴入底物溶液后，底物可以在酶的作用下將其所含的氫氣從無色還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩趸?，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。

因此，可以通過底物的顏色反應(yīng)來判斷是否有相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深度與標本中相應(yīng)的抗體或抗原的數(shù)量成正比。這種顯色反應(yīng)可以通過ELISA檢測儀進行定量測量，將酶化學變化的敏感性與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，使ELISA方法成為一種特殊而敏感的檢測方法。擴展材料：ELISA試驗的基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體中 ( 少量聚乙烯反應(yīng)板 ) 表面，使酶標記的抗原抗體在固相表面發(fā)生反應(yīng)，用洗滌法清除液相中的分散成分。常見的 ELISA 該方法包括雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于檢測特定抗體。

ELISA已廣泛應(yīng)用于各種細菌和病毒的診斷。在動物檢疫方面，ELISA已廣泛應(yīng)用于豬傳染性胃腸炎、牛副肺結(jié)核、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷。

elisa有幾種類型，原理是什么？

1.類型的三明治法常用于檢測大分子抗原，將特定的抗體固定在塑料孔板上，洗掉多余的抗體，重復兩次，洗掉多余的二次抗體，加入酶底使酶呈色，用人眼或儀器讀取呈色結(jié)果。間接法常用于檢測抗體，將已知的抗原固定在塑料孔板上，洗掉多余的抗原，重復兩次。

洗掉多余的未鍵二次抗體，加入酶底物使酶呈色，通過儀器測量塑料板中的吸光值，評估有色終產(chǎn)品的含量，測量待測抗體的含量。

競爭方法是一種較少使用的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，將特定抗體固定在塑料孔板上，清除多余抗體；添加被測體，含酶抗原，與塑料孔板上的抗體特定鍵結(jié)。塑料孔板上固定抗體的數(shù)量并不多。體檢中抗原的數(shù)量越多，含酶的抗原就越少。2、原理是將待檢標本和酶標抗原或抗體按不同工藝與固相載體表面抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)。固相載體上的抗原抗體復合物通過洗滌與其他物質(zhì)分離，最終將固相載體上的酶量與標本中待檢物質(zhì)的量成一定比例。

添加酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的數(shù)量與標本中待檢物質(zhì)的數(shù)量密切相關(guān)，因此可以根據(jù)顏色反應(yīng)的深度進行定性或定量分析。擴展材料:Elisa應(yīng)用Elisa生物實驗敏感性高，非特異性強，重復性好。由于其試劑穩(wěn)定、易儲存、操作方便、結(jié)果判斷客觀等因素，已廣泛應(yīng)用于免疫檢測的各個領(lǐng)域。

ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中抗人戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢查。

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